在NGS领域，tn5酶算是明星了，不管是表观建库如ATAC-seq、CUT&Tag还是在极速建库领域抑或是一步法建库技术等等的应用都颇为广泛，完全是主角的存在。那tn5酶是怎么完成建库的呢？ 

原始Tn5酶是由两个1.5 kb的IS50插入序列夹带的抗生素耐药区组成，IS50L和IS50R。它是通过多步骤酶切-粘贴机制行使功能。具体为：两分子tn5转座酶单体首先结合到IS50元件末端的两个19 bp区域（OE序列和IE序列），然后通过二聚体形成突触复合体；转座酶促进重组的三个核心步骤 

1.这些蛋白可以识别移动元件末端的特定DNA序列，并将它们配对形成突触复合体；

2.这些蛋白在元件的每一端切割DNA，将元件的3'OH端从嵌入的DNA中解放出来；

3.这些蛋白促进新的DNA位点上的末端的两个磷酸二酯键被攻击，从而将元件的基因组连接到新的DNA片段。水在裂解阶段扮演亲核试剂的攻击角色，而元件的3 '羟基在DNA连接阶段(称为DNA链转移)扮演亲核试剂的角色[1]。